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BCA蛋白定量試劑盒價格是多少(蛋白定量試劑盒使用方法)

更新時間:2024-05-24      點擊次數(shù):454

BCA (Bicinchoninic acid) 法是目前應用比較廣泛的蛋白質(zhì)濃度測定方法。基于雙縮脲反應,即在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)將Cu2+還原成Cu+,Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡(luò)合物,在562 nm處有高的吸光值,該反應產(chǎn)物的量與蛋白質(zhì)濃度成正比。測定其在562 nm處的吸光值,并與標準曲線對比,即可計算待測蛋白的濃度。該方法快速靈敏、穩(wěn)定可靠且對不同種類蛋白質(zhì)變異系數(shù)很小。試劑盒中提供了濃度穩(wěn)定的蛋白標準品用于制作標準曲線。

BCA 蛋白定量試劑盒可用于試管法檢測,也可用于微孔板法檢測。試管法需較大量蛋白樣品(100 μL)和工作液(2 mL),蛋白樣品與 BCA 工作液的比率為1:20(v/v),蛋白質(zhì)測定范圍為20-2000 μg/mL,采用加強法可以檢測到 5 μg/mL;微孔板法操作簡單方便,僅需少量(10-25 μL)的蛋白樣品和工作液(200 μL),蛋白樣品與工作液的比率為1:20(v/v)或者1:8(v/v),蛋白質(zhì)測定范圍為 20-2000 μg/mL,采用加強法可以檢測到 5 μg/mL。

BCA蛋白定量試劑盒價格是多少?

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BCA蛋白定量試劑盒使用方法

一、配制標準品和工作液

1. 配制 BSA 標準品體系(線性范圍20-2000 μg/mL或者5-250μg /mL標準品制備各2種配置方法,請根據(jù)習慣選用恰當方式)。【注】:BSA 標準品濃度為2 mg/mL,稀釋液為蛋白樣品的溶解液,原則上蛋白樣品在什么溶液中,標準品也宜用什么溶液稀釋。但也可用水或 1 X PBS 進行稀釋。

BSA 標準品體系配制表(配制后可放置于4℃ 冰箱多次使用)

表1.微孔板檢測BSA 標準品體系配制(線性范圍 20-2000 μg/mL)配置方法一

Vial

稀釋液體積(μL)

BSA標準品體積(μL)

BSA終濃度(μg/mL)

A

0

100

2000

B

25

75

1500

C

50

50

1000

D

83

50

750

E

75

25

500

F

140

20

250

G

150

10

125

H

158

2

25

I

100

0

0=Blank

表2.微孔板檢測BSA 標準品體系配制(線性范圍 20-2000 μg/mL)配置方法二

Vial

稀釋液體積(μL)

BSA標準品體積(μL)

BSA終濃度(μg/mL)

A

0

BSA 標準液100

2000

B

25

BSA 標準液75

1500

C

65

BSA 標準液65

1000

D

35

Vial B 35

750

E

65

Vial C 65

500

F

65

Vial E 65

250

G

65

Vial F 65

125

H

80

Vial G 20

25

I

80

0

0=Blank

表3.BSA標準品體系(微孔板檢測,線性范圍 5-250μg /mL)配置方法一

Vial

稀釋液體積(μL)

BSA標準品體積(μL)

BSA終濃度(μg/mL)

A

70

10

250

B

75

5

125

C

78

2

50

D

79

1

25

E

399

1

5

F

80

0

0

表4.BSA標準品體系(微孔板檢測,線性范圍 5-250μg /mL)配置方法二

Vial

稀釋液體積(μL)

BSA標準品體積(μL)

BSA終濃度(μg/mL)

A

70

BSA 標準液10

250

B

40

Vial A 40

125

C

45

Vial B 30

50

D

40

Vial C 40

25

E

40

Vial D 10

5

F

40

0

0

2. 配制 BCA工作液

(1) 計算所需要的總BCA 工作液體積。總BCA工作液體積=(標準品數(shù)量+待測樣品數(shù)量)x重復數(shù)x每個樣品所需要的BCA 工作液。【注】:試管法檢測時每個樣品加 2.0 mL BCA 工作液,微孔板檢測每個樣品加200 μL BCA 工作液。

(2) 配制BCA工作液:50 體積的BCA 試劑 A 中加入1 體積的BCA 試劑B(A:B=50:1),充分混勻。【注】:BCA工作液裝入密封容器內(nèi),室溫條件24h 穩(wěn)定。

二、檢測方法

1. 試管檢測方法(樣品:BCA工作液=1:20)

(1) 各取100 μL 標準品和待測樣品加入到反應管中。

(2) 每管加入2.0 mL BCA 工作液,混勻。根據(jù)待測樣品的濃度范圍選擇孵育時間和溫度。

標準孵育方法:37℃ 孵育30 min 或者室溫2h(檢測范圍:20-2000 μg/mL)

增強孵育方法:60℃ 孵育30 min(檢測范圍:5-250 μg/mL)

【注】:BCA 檢測蛋白濃度,延長孵育時間會加深顏色反應。升高溫度會加快顯色反應,但是溫度升高和時間延長會降低檢測下限,以及降低工作線性范圍。若蛋白濃度很低,可在較高溫度孵育或者適當延長孵育時間。

(3) 冷卻到室溫。在分光光度計上進行檢測,設(shè)定波長為 562 nm,在10 min內(nèi)對所有樣品讀數(shù)。【注】:由于BCA 反應達不到真正的反應終點,即使溫度降低至室溫生色反應液會繼續(xù)。但是,由于室溫下生色比率相當?shù)停虼巳羰?0 min 內(nèi)能對所有的樣本進行 562 nm 吸光度的測試,不會導致明顯錯誤。

(4) 根據(jù)BSA 標準品的吸光度(減去標準品中空白孔的OD 值即最終的讀數(shù)),繪制標準曲線(X-蛋白濃度μg/mL;Y-最終的OD 562nm)。依據(jù)標準曲線和樣品的稀釋倍數(shù)計算樣品蛋白濃度。

2. 微孔板檢測方法(樣品: BCA工作液=1:20)

(1) 各取10 μL標準品和待測樣品加入到微孔板中。【注】:樣品與工作液比例為1:20,檢測范圍為125-2000 μg/mL。若樣品濃度非常低,可使用25μL 標準品和待檢測樣品進行檢測(即1:8),這時試劑盒的檢測范圍為 20-2000 μg/mL。

(2) 每孔加入200 μL BCA 工作液,槍頭吹打充分混勻。蓋上微孔板,37℃ 孵育30 min。

(3) 冷卻到室溫,在酶標儀上的562 nm 波長范圍處檢測吸光度。

(4) 根據(jù)BSA標準品的吸光度(減去標準品中空白孔的OD值即最終的讀數(shù)),繪制標準曲線( X-蛋白濃度μg/mL;Y-最終的OD 562nm)。依據(jù)標準曲線和樣品的稀釋倍數(shù)計算樣品蛋白濃度。


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