溶酶體染色試劑盒的重要理論
更新時間:2018-08-09 點擊次數:1380
溶酶體染色試劑盒通常勻化次數為20至40下(或細胞顆粒群/組織塊狀消失為止)達到80%的細胞裂解為理想狀態,但不同的組織或細胞類型會存在差異。用戶可以通過顯微鏡觀察3微升勻漿物的細胞裂解程度,完整細胞呈現發亮的圓環,低于50%可以增加勻化次數。通常孵育5分鐘(不宜超過5分鐘)達到80%的細胞裂解為理想狀態,但不同的組織或細胞類型會存在差異。用戶可以通過顯微鏡觀察3微升裂解物的細胞裂解程度,完整細胞呈現發亮的圓環。低于50%可以增加孵育時間和渦旋震蕩次數。
溶酶體染色試劑盒可將胞內廢物、脂質、碳水化合物、蛋白質及其他大分子等物質分解為小分子化合物。正常的溶酶體功能使細胞能有效的動員和循環利用細胞組分,但也能阻止受損細胞器、錯誤折疊蛋白質及入侵病原物的積累。雖然溶酶體存在于所有動物細胞中,但在抗病細胞如淋巴細胞中豐度高。溶酶體含有約50種不同的降解酶,所有水解酶在pH5左右活性,但其周圍胞質中pH為7.2。溶酶體膜內含有一種特殊的轉運蛋白,可以利用ATP水解的能量將胞質中的H+泵入溶酶體,以維持其pH5。這些酶協同作用,以維持蛋白和細胞器的穩態。若溶酶體內的這些酶發生異常則會導致多種疾病的產生,這些酶如組織蛋白酶D的表達水平顯著降低。上調表達溶酶體基因的水平,正探索作為治療神經退行性疾病如帕金森癥的一種潛在的治療途徑。
統計學分析所得計量數據采用均數±標準差(X±S)表示采用SPSS17.0進行統計分析,兩樣本均數的比較采用獨立樣本t檢驗,p<0.05為具有統計學差異。每組實驗結果重復3次。結果2.1 Lysotracker Red染色觀察CREG對小鼠腹腔巨噬細胞溶酶體發生數量的影響不同實驗組小鼠腹腔巨噬細胞Lysotracker Red染色結果顯示,與C57小鼠相比,CREG+/-雜合子小鼠腹腔巨噬細胞中lysotracker紅色熒光強度明顯減少。而與CREG+/-雜合子小鼠相比,微量滲透泵以30μg/kg/d皮下給予重組CREG蛋白的CREG+/-雜合子小鼠腹腔巨噬細胞lysotracker紅色熒光強度明顯增加。