簡要描述:PikoGreen dsDNA定量試劑盒(Broad Range)是一種極為靈敏的雙鏈DNA熒光染料,于雙鏈DNA的定量。測定DNA濃度在cDNA文庫構(gòu)建、DNA亞克隆、PCR產(chǎn)物估測等領(lǐng)域中非常重要,另外疫苗等生物制品中殘留微量DNA的檢測因關(guān)系人身健康,顯得尤為重要。
詳細(xì)介紹
品牌 | 其他品牌 | 貨號 | AN54L017 |
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規(guī)格 | 200assays | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品描述
PikoGreen是一種極為靈敏的雙鏈DNA熒光染料,僅與DNA雙鏈結(jié)合后才發(fā)出熒光,且所產(chǎn)生的熒光與DNA濃度呈正比,在存在ssDNA、RNA和單體核苷酸的條件下,可以選擇性地檢測低至25 pg/mL的dsDNA。與傳統(tǒng)DNA定量方法相比,具有如下優(yōu)點:
靈敏:數(shù)量級較UV吸光讀數(shù)更敏感,可節(jié)省樣品。
特異性強(qiáng):只結(jié)合dsDNA,特異性強(qiáng),不受樣品常規(guī)污染影響。傳統(tǒng)紫外吸光法容易受樣品中存在的單鏈DNA,蛋白,RNA等影響。
耐受性好:耐受較高濃度的鹽、尿素、乙醇、氯仿、去垢劑、蛋白或瓊脂糖,可以直接定量PCR擴(kuò)增產(chǎn)物而無需從反應(yīng)混合物中純化DNA。
線性范圍寬:PikoGreen dsDNA染料測定DNA濃度,在100 pg/mL~100 ng/mL范圍內(nèi)呈良好線性。
方便操作:在樣品中加入染料,染色5~6 min,然后讀數(shù)即可,且適用于96和384孔板。與大多數(shù)基于熒光的酶標(biāo)儀兼容。
本產(chǎn)品可適用于各種DNA樣品分析、PCR的分析、芯片樣品、DNA損傷分析、酶活性分析、基因組DNA定量以及復(fù)雜混合物中dsDNA的檢測和病毒DNA定量等多種領(lǐng)域。
訂購信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
PikoGreen dsDNA定量試劑盒(Broad Range) | AN54L017 | 200 assay |
PikoGreen dsDNA定量試劑盒(Broad Range) | AN54L018 | 1000 assay |
產(chǎn)品組分
組分 | AN54L017(200 assay) | AN54L018(1000assay) |
A:1×定量緩沖液 | 50 mL | 250 mL |
B:Piko Green Dye 100 × in DMSO反應(yīng)液 | 0.5 mL | 2.5 mL |
C:100×反應(yīng)增強(qiáng)液 | 0.5 mL | 2.5 mL |
D: dsDNA 標(biāo)準(zhǔn)品9 x 0.5 mL(0 , 2, 6.25, 12.5 , 25, 50 , 100, 150 and 200 ng/μL) | 9管(每管0.1 mL) | 9管(每管0.5 mL) |
保存方法
冰袋運輸,4℃避光干燥保存,保質(zhì)期36個月。如果較長時間不用,建議把組分C與組分D放置于-20℃保存。
使用方法
(以96孔板為例)
1.使用前,將產(chǎn)品從儲存條件下取出恢復(fù)至室溫。PikoGreen提供的是DMSO溶液,在4℃存放時成固體,可37℃水浴溶解。每個組分應(yīng)充分震蕩或渦旋混勻、離心,以免造成不必要的試劑損耗。
2.分別吸取19.6 mL組分A, 200 μL組分B, 200 μL組分C配制成20 mL1×PikoGreen工作液。新配工作液應(yīng)在1 h內(nèi)使用,工作液存放重新使用時須重懸,以免染料沉淀,工作液存放24 h,會輕微影響定量結(jié)果。
3.每個樣品,吸取200 μL 的工作液至黑色的96孔板微孔中。為確保結(jié)果精確可靠,建議每個測試樣品和DNA標(biāo)樣分別做平行的3個復(fù)孔。
黑色的檢測板可以減少各測試樣品間的熒光干擾。
4.96孔板微孔中,分別加入dsDNA標(biāo)樣或待測樣品各10 μL,并用移液器輕輕混勻。
5.將微孔板室溫避光孵育10分鐘,在Ex(nm):350, Em(nm):460處用酶標(biāo)儀測量熒光值。
6.制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,計算樣品濃度。
注意事項
1.為了得到最佳結(jié)果,請使用精確校準(zhǔn)的移液器和去RNA酶的槍頭、試管以及檢測板。
2. 建議檢測時每個DNA標(biāo)樣和未知樣品都設(shè)定3個復(fù)孔。如果檢測時不只一塊96孔板,建議每塊96孔板都設(shè)定一條標(biāo)準(zhǔn)曲線,盡量減少檢測板之間的誤差。
3. 為得到最佳結(jié)果,檢測板應(yīng)在一小時內(nèi)讀取完畢。如果將反應(yīng)液重新儲存并在24 h內(nèi)讀取數(shù)據(jù),結(jié)果的精確性會有輕微損失。
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