產品描述

EZ Trans siRNA轉染試劑，是一種基于陽離子高分子聚合物開發的新型轉染試劑，適用于siRNA 及microRNA (miRNA) 的轉染。本產品能在多種常見細胞中實現高效率、低毒性的轉染效果，且具有操作簡便，重復性佳等優點，適用于 siRNA或miRNA 介導的基因抑制實驗。

訂購信息

運輸與保存

藍冰運輸。4℃保存，有效期 6個月；-30℃至-10℃保存，有效期12個月。注：避免反復凍融。

使用方法（以 24 孔板為例，其他培養皿中轉染請參考表 1）

1． 接種細胞

對于貼壁細胞：轉染前一天，將細胞按照每孔1-2x10^5個細胞的量進行鋪板，使其在轉染時密度為60%-80% 為佳。

對于懸浮細胞：轉染當天，配制轉染試劑-核酸復合物之前，用PBS清洗細胞1-2次，用250 μL Opti-MEM I 減血清培養基 (無血清) 重懸細胞，在24孔板中進行細胞鋪板，細胞密度為60-80%。

2． 準備轉染試劑-siRNA復合物（或轉染試劑-miRNA復合物）

(1)  對于每孔細胞，取2 μLsiRNA (20 μM，DEPC水溶解)加入到1.5mL離心管中，加入2 μL轉染試劑與siRNA 混合，室溫孵育3 min。

(2)  往上述混合物中加入100 μL Opti-MEM I減血清培養基(無血清)，輕輕混勻，在室溫下靜置30 min，形成轉染試劑-核酸復合物。

(3)  30 min后，往上述復合物中加入250 μLOpti-MEM I減血清培養基(無血清)，輕輕混勻。

3． 轉染細胞

(1)  細胞用PBS清洗1-2次，將上述350µL轉染試劑-siRNA復合物加入每孔細胞。

(2)  在 37℃，5% CO2 培養箱培養 24-48 h，無需更換新的培養液，之后即可檢測基因干擾效果或者后續功能實驗。可在轉染 12h 后補充 150μL 培養基 (含血清)，總體積達到 500μL，即達到常規的培養皿使用培養液的量。

注意事項

1.    本產品僅限于科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領域。

2.    小RNA(siRNA/miRNA)質量：請務必使用高純度無內毒素轉染級RNA。

3.    整個實驗過程使用無RNA酶和無熱原性的材料，如離心管、槍頭、緩沖液。

4.    細胞條件：細胞狀態會極大影響轉染效率，待轉染細胞應處于良好生長狀態，建議使用生長處于指數期、存活率大于90% 的細胞進行轉染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞，請在轉染前至少傳代兩次。

5.    細胞培養液要求：EZ Trans 細胞轉染試劑可用于有血清培養基的轉染，并且轉染前后不需要換培養基。

6.    由于某些特殊培養基中的成分可能會抑制陽離子聚合物介導的轉染，因此建議測試這些培養基與本產品的相容性，以確保最佳轉染效果。

7.   細胞類型、基因特性、siRNA/miRNA的效力、靶mRNA的半衰期和靶蛋白的周轉率等因素都會影響siRNA/miRNA介導的基因敲低效果。

8.   建議siRNA/miRNA工作濃度在10-100nM之間，轉染試劑的體積應根據siRNA/miRNA濃度和培養皿的大小進行調整，請參見表1。

表 1：不同培養體積對應的待轉siRNA/miRNA、 EZ Trans、稀釋液用量

注：該表使用量僅供參考，具體使用量還需根據細胞類型及其他實驗條件進行優化。a: 稀釋轉染試劑-RNA復合物所需培養基的量；b: 加入轉染試劑-RNA復合物的培養基的量。

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本產品僅限于科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領域。