產品描述

本試劑盒基于分子排阻色譜原理（SEC法），通過分子大小差異實現外泌體分離，具有操作簡便、高純度和高回收率的優點，特別適用于大體積樣本的外泌體分離。分離的外泌體可用于 WB 分析、NTA 或納米流式粒徑分析、電鏡檢測、組學研究及細胞和動物實驗中的功能研究。本試劑盒常用于細胞培養上清、尿液等大體積樣本，也適用于血清、血漿等樣本。

訂購信息

產品組分

運輸與保存

常溫運輸。組分A在4℃保存，組分B常溫保存，有效期12個月。

使用方法

自備儀器、試劑與耗材：高速冷凍離心機、離心管、超濾管（MWCO：50 kDa）、PBS（現配現用，0.2um 過濾，超聲或真空脫氣）、20%乙醇（現配現用，0.2um 過濾，超聲或真空脫氣）、純化柱固定器(自行購買或者合適的固定試管鐵架臺，以避免操作過程中發生晃動)

1.    樣品預處理

(1）       去除細胞：將樣品在 4℃、300g 離心 5 min，轉移上清至新離心管；無細胞樣本可跳過此步驟。

(2）       去除細胞及碎片：4℃、2,000g 離心 10 min，轉移上清至新離心管。

(3）       去除大體積顆粒：步驟 (2)得到的上清，在 4℃、14,000g 下離心 30 min，轉移上清至新離心管。

2.    純化柱預處理

(1)   將外泌體純化柱（Exosome Purification Column(10mL)）安裝在純化柱固定器上，下方放置廢液槽。讓純化柱在室溫（18-25℃）平衡至少 30 min；溫度過低或過高會影響分離效果。

(2)   檢查純化柱下端是否充滿液體，如無空氣可跳過此步驟；若有空氣，將純化柱倒置，打開下端密封帽，用移液器或注射器注入水或 20% 乙醇頂出空氣，使密封帽中充滿液體后重新蓋上，并放回固定器。

(3)   打開純化柱頂蓋，再打開下端密封帽，棄去封柱液（可倒掉或用移液器吸出），將純化柱適配器（Column Adapter (10 mL)）連接到純化柱，從頂部加入 2 倍柱體積（20 mL）PBS 進行平衡，至下端無溶液流出。清洗過程中確保頂部篩板始終保持濕潤。完成后，蓋上底端密封帽，斷開適配器，并加入 1 mL PBS 備用。

注：

①    每次操作前應先打開純化柱上蓋，再打開下端密封帽，以避免空氣進入，影響分離效果。

②    分離過程中確保純化柱頂部篩板始終濕潤，以保持最佳分離效果。

③    向純化柱中加入大體積溶液時，可將適配器連接到純化柱，將溶液加入到適配器中。

④    PBS 建議新鮮配制并通過 0.2 μm 濾膜過濾，或使用商業的無菌 PBS 以防微生物或顆粒污染。PBS使用前必須平衡至室溫，以避免純化柱中出現氣泡影響分離效果。

3.    分離外泌體

(1)   樣品上樣：移除純化柱中的 PBS，在上方加入 1 mL 樣本；如樣本不足 1 mL，可用 PBS 補至 1 mL，混勻后上樣。取下純化柱底部密封帽，待樣本全部進入純化柱后再加 PBS。

注：

①    如樣本體積超過 1 mL，建議用 50 kDa 超濾管將樣本濃縮至 1 mL，濃縮倍數不超過 20 倍（具體操作見超濾管使用說明書）。

②    對于高粘度樣本（如血漿、血清、高粘度胸腹水等），可取 0.5 mL 樣本用 PBS 稀釋至 1 mL，混勻后上樣。

③    待樣品進入篩板后再加入 PBS，以避免樣品被稀釋影響分離效果。

(2)   外泌體分離：在純化柱下方放置 1.5 mL 離心管，向上方加入 0.5 mL PBS，待下方收集到 0.5 mL 餾分后，繼續加入 0.5 mL PBS，并更換新的 1.5 mL 離心管收集。按流出順序標記各餾分管編號。

(3)   外泌體收集：收集 4、5、6、7、8 號餾分管以獲得外泌體，其中 5、6、7 號餾分管的外泌體濃度更高。可直接對收集液測定外泌體顆粒數和蛋白濃度。

(4)   外泌體濃縮：測定外泌體顆粒濃度和蛋白濃度后，根據后續實驗需求，可選擇是否進行濃縮。如需濃縮，建議使用 MWCO 50 kDa 的超濾管，在 4,000g 離心至所需體積即可。

4.    純化柱維護

(1)   收集所有餾分后，將適配器連接至純化柱，從頂部加入至少 2 倍柱體積（20 mL）PBS清洗純化柱，至下方無溶液流出。

(2)   繼續加入 1.5 倍柱體積（15 mL）20% 乙醇清洗，至下方無溶液流出。

(3)   最后，取下適配器，向純化柱中加入 3 mL 20% 乙醇封閉液，安裝純化柱頂蓋，并在密封帽中填滿 20% 乙醇，蓋到純化柱下端出口，于 4℃直立保存。

注意事項

1． 本產品僅限于科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領域。

2． 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

3． 新購買或使用后的純化柱，上篩板和白色瓊脂糖微球之間可能會出現一定的空隙，這是儲存和使用過程中凝膠沉降造成的，并不影響純化柱的性能，將上篩板向下推至無空隙即可正常使用。

4． 本試劑盒常用于細胞培養上清、尿液等大體積樣本，也適用于血清、血漿等樣本。其他微量珍貴樣本，請向本公司技術人員咨詢。

5． 純化柱保存在封閉液中，封閉液為 20%乙醇。20%乙醇建議現配現用，同時經 0.2um 濾膜過濾、超聲或真空脫氣，避免造成純化柱出現大量氣泡，影響分離效果。

6． 每次純化柱使用前需要使用無菌并平衡至室溫的 PBS 清洗。PBS建議現配現用，同時經 0.2um 濾膜過濾、超聲或真空脫氣，避免造成純化柱出現大量氣泡，影響分離效果。

7． 純化柱中間不能有氣泡，使用前后需認真檢查，避免影響實驗。

8． 純化柱可以反復利用，但是多次使用會影響效果，建議重復使用不超過5次。

9． 當分離的外泌體進行 NGS 或者其他組學分析時，為避免交叉污染，建議每個樣品使用一支新的純化柱。

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本產品僅限于科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領域。